Download miễn phí Thụ tinh trong ống nghiệm trên đối tượng bò
Sự thành công phụ thuộc chủ yếu vào sự chín của tinhtrùng (sự hoạt
hoá
và tế bào trứng. Hơn nữa, để có thể có được một con bê ra đời qua con đường phôi cấy vào tử cung tử cung bằng phương pháp không phẫu thuật thì
phôi đó phải được nuôi cấy cho đến khi có 8 tế bào hay cho tới giai đoạn
phôi nang thì càngtốt. Những ví dụ về IVF bò được ghi trong bảng 5
Để tải bản Đầy Đủ của tài liệu, xin Trả lời bài viết này, Mods sẽ gửi Link download cho bạn sớm nhất qua hòm tin nhắn.
Ai cần download tài liệu gì mà không tìm thấy ở đây, thì đăng yêu cầu down tại đây nhé:
Nhận download tài liệu miễn phí
Tóm tắt nội dung tài liệu:
Thụ tinh trong ống nghiệmtrên đối tượng bò
1 Nuôi chín tế bào nang trứng và nuôi cấy in vitro
Thụ tinh trong ống nghiệm (IVF) bò sẽ thành công hơn nếu trứng
được thu hoạch từ buồng trứng hay từ các nang trứng chín (tế bào trứng thứ
cấp). Tuy nhiên, các trứng trong nang chưa chín vẫn được sử dụng nhờ áp
dụng quá trình gây siêu bài noãn. Các tế bào trứng thu hoạch được từ các
nang trứng có đường kính 2-5 mm cần được nuôi chín cho đến khi đạt tới
giai đoạn II của quá trình phân chia (Metaphase II) (tương ứng với "tuổi"
của trứng khi trứng rụng tự nhiên). Hiện tượng " nuôi chín in vitro " này đã
được tiến hành rất nhiều kể từ khi Sreenan báo cáo lần đầu tiên (1970). Hiện
nay, tế bào trứng bò được nuôi cấy trong huyết thanh thai bê (10-20%), ví dụ
TCM199, trong 24-28 giờ với tỷ lệ chín của tế bào trứng là 60-80% và đã
thành công trong IVF. Nhưng có một điều hết sức quan trọng là phải thu
thập được tế bào trứng hoàn hảo, nghĩa là không chỉ có nhân chín mà còn
phải có nguyên sinh chất hoàn hảo và vòng trong suốt tròn rõ.
2 Hiện trạng và những vấn đề của IVF
Trong năm 1959, Chang đã tạo một động vật có vú đầu tiên từ quá
trình IVF trên thỏ. ở người, hơn 1000 cháu bé ra đời bằng IVF kể từ sau ca
IVF đầu tiên thành công của Steptoe và Edward (1978). ở Nhật, thành công
đầu tiên đã đến với nhóm nghiên cứu thuộc Bệnh viện Tổng hợp Tohoku
(1983), tiếp đến là rất nhiều thành công của các bệnh viện tổng hợp khác
trong toàn quốc.
Bảng 1. Thành tựu về IVF ở động vật có vú
Tác gia Loài được
nghiên cứu
Kết quả đạt được
Chang (1959) Thỏ Đẻ con
Dauzler &
Thibault (1959)
Cừu Tiền nhân
Yanagimachi &
Chang (1964)
Chuột đồng
Trung Quốc
Thâm nhập, tiền nhân và
phân chia tế bào
Whittingham
(1968)
Chuột Phân chia tế bào và thai
Pickworth &
Chang (1969)
Chuột đồng
Trung Quốc
Thâm nhập và tiền nhân
Edwards et al.
(1969)
Người Thâm nhập và tiền nhân
Hamner et al.
(1970)
Mèo Phân chia tế bào
Yanagimachi
(1972)
Chuột Lang Thâm nhập, tiền nhân và
phân chia tế bào
Gould et al. Khỉ Rhesus Tiền nhân và phân chia
(1973) tế bào
Miyamoto &
Chang (1973)
Chuột Thâm nhập và tiền nhân
Iritani et al.
(1975)
Lợn Thâm nhập, tiền nhân và
phân chia tế bào
Mahi &
Yanagimachi (1976)
Chó Thâm nhập (mở rộng
đầu)
Iritani & Niwa
(1977)
Bò Thâm nhập và tiền nhân
Hanada & Chang
(1978)
Hươu chuột Thâm nhập và tiền nhân
Hanada &
Tsutsumi
Dê Thâm nhập
Khi IVF ở người, tế bào nang trứng được lấy ra từ người mẹ bằng
phương pháp nội soi ngay trước kỳ trứng rụng, sau đó tế bào trứng này được
cho thụ tinh với tinh trùng của người chồng, nuôi cấy cho phát triển đến giai
đoạn 4-8 tế bào và cấy trở lại vào tử cung người mẹ. Phương pháp này được
gọi là IVF-ET (In vitro Fertilization and Embryo Transfer) vì nó gồm hai kỹ
thuật: thụ tinh trong ống nghiệm và cấy truyền phôi.
Đã có nhiều công trình về IVF ở động vật có vú được công bố. Phần
lớn đề cập đến sự xâm nhập của tinh trùng vào trong tế bào trứng, việc tạo ra
tiền nhân và sự bắt đầu phân chia (Bảng 1).
Quá trình IVF-ET được áp dụng đầu tiên trên người, và thí nghiệm
nhiều trên động vật (như chuột nhắt, chuột cống, thỏ) nhưng có rất nhiều báo
cáo về sự thành công trên đối tượng gia súc ở thập kỷ 80 (bảng 2).
Bảng 2.? Một số? động vật có vú? ra đời lần đầu tiên do IVF
Tác gia Loài
động vật
Tác gia Loài
động vật
Chang (1959) Thỏ Brackett et Bò
al. (1982)
Whittingham
(1968)
Chuột Hanada
(1985)
Dê
Shiba
Toyoda &
Chang (1974)
Chuột
cống
Hanada
(1985)
Cừu
Steptoe &
Edwards (1978)
Người Cheng et al.
(1986)
Lợn
Brackett (1982) là người đầu tiên báo cáo về thành công IVF trên bò.
Ngày nay kỹ thuật này đã được áp dụng trên toàn thế giới trong đó có Nhật
Bản (bảng 3). Nhưng vẫn còn nhiều vấn đề cần được giải quyết, chứ không
giống như làm IVF trên đối tượng chuột nhắt, chuột cống và người.
Bảng 3. Số liệu về các ca chửa đẻ ở bò được IVF
Tác gia Trứng Tinh
trùng
Phát triển
của tế bào trứng
Kết quả
?lúc được
truyền cấy
Brackett et
al., 1982
IVM Tươi 4 tế bào 1 bê
Brackett et
al., 1982
IVM Tươi
(?)
4 tế bào
(?)
2 bê
(sinh đôi)
Hanada et
al., 1986
IVM Đông
lạnh
Phôi dâu-
nang
3 bê
Sirard et
al.,1986
IVM Tươi Phôi nang
8 tế bào
7 bò có
chửa, đẻ 6 bê
Shimohira
et al, 1986
IVM Đông
lạnh
1 tế bào 1 sẩy
thai (210 ngày)
Parrish et IVM Đông Phôi dâu,
nang đông lạnh
3 bê (có
al., 1986 lạnh và giải đông 2 sinh đôi)
Lu et al.,
1987
IVM Đông
lạnh
Phôi dâu-
nang
11 bò có
chửa
Fukushima
et al, 1987
IVM Đông
lạnh
Phôi nang 3 bê
Aoyagi,
1987
IVM Đông
lạnh
Phôi dâu-
nang
3 bê
- IVM (in vitrro maturation): Nuôi chín trong ống nghiệm
- Các trứng sau khi thụ tinh được nuôi cấy trong tử cung thỏ và tử
cung cừu
Quy trình thụ tinh trong ống nghiệm bò được trình bày ở bảng 4.
Bảng 4. Các nội dung hoạt động và kỹ thuật cần thiết cho IVF
Nội dung Tiến hành
Lấy tinh Giải đông tinh (đông lạnh).
Epididymis tinh trùng
Hoạt hoá tinh trùng Trong đường sinh dục của con cái
động dục
Nuôi cấy trong cơ quan sinh dục
Nuôi cấy trong môi trường nuôi cấy
tổng hợp
Thu hoạch trứng Trứng rụng tự nhiên. Trứng trong
nang trứng
Nuôi chín tế bào trứng Nuôi chín in vitro. Nuôi cấy trong
môi trường tổng hợp
Thụ tinh Môi trường nuôi cấy phù hợp
Nồng độ tinh trùng. Đánh giá tinh
trùng
Nuôi cấy các trứng đã
được thụ tinh
Trong cơ quan sinh sản cùng loài
hay khác loài
Cấy truyền các trứng đã
được thụ tinh
Phương pháp phẫu thuật hay không
phẫu thuật
Sự thành công phụ thuộc chủ yếu vào sự chín của tinh trùng (sự hoạt
hoá) và tế bào trứng. Hơn nữa, để có thể có được một con bê ra đời qua con
đường phôi cấy vào tử cung tử cung bằng phương pháp không phẫu thuật thì
phôi đó phải được nuôi cấy cho đến khi có 8 tế bào hay cho tới giai đoạn
phôi nang thì càng tốt. Những ví dụ về IVF bò được ghi trong bảng 5.
Bảng 5. Những thành tựu chủ yếu đối với kỹ thuật IVF trên bò ở Nhật
Bản
Tác gia, Cơ
quan, năm
Điều
kiện nuôi
trứng chín
IVM
Điều
kiện xử lý
tinh trùng
Điều
kiện nuôi cấy
sau IVF
Kết quả
Hanada et
al. (Viện
Quốc gia,
1985)
Nuôi
chín in vitro
cùng với
hormone
Caffein
+ Ca++
Tử
cung thỏ
Đẻ (chết
khi sinh)
Hanada et
al. (Viện
Quốc gia,
1986)
Nuôi
chín in vitro
cùng với
hormone
Caffein
+ Ca++
Tử
cung thỏ
2 bê
Shimohira
et al. (Viện
Quốc gia,
1986)
Nuôi
chín in vitro
cùng với
hormone
Caffein
+ Ca++
Tử
cung thỏ
3 bê, bao
gồm 2 bê sinh
đôi
Fukushima
et al. (Viện
Nuôi
chín in vitro
không
Caffein
+ Ca++
Tử
cung thỏ
3 bê
Quốc gia
Hyogo, 1987)
hormone
Kajiwara et
al. (Trường
ĐH
Kagoshima, 1987)
Nuôi
chín in vitro
cùng với
hormone
Caffein
+ Ca++
Nuôi
cấy in vitro
cùng T.bào
Cumulus
Phôinang
trương nở?
(13%)
Fukuda et
al. (Trường
Kitazaro, 1987)
Nuôi
chín in vitro
cùng với
hormone
Caffein
+ Ca++
Nuôi
cấy in vitro
cùng T.bào
Cumulus
Phát triển
thành phôi nang
(11%)
Aoyagi et
al. (Trường ...