Download miễn phí Luận văn Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học của lá cây đơn tướng quân ( syzygium formosum wall), họ myrtaceae ở Thái Nguyên
MỤC LỤC Trang
Lời cam đoan
Lời Thank
Danh mục chữ viết tắt dùng trong luận văn
Danh mục các hình, bảng và sơ đồ
Mở đầu
Chương 1 Tổng quan1
1.1. Khái quát về các thực vật chi Syzygium 3
1.2. Những nghiên cứu hóa thực vật về chi Syzygium 5
1.2.1. Các hợp chất acetophenon 5
1.2.2. Các biflorin 8
1.2.3. Các hợp chất flavonoit 9
1.2.3.1. Hợp chất flavanon 9
1.2.3.2. Các hợp chất flavonoit 10
1.2.4. Các hợp chất chalcon 12
1.2.5. Các hợp chất triterpenoid 13
1.2.5.1. Triterpen khung oleanan 13
1.2.5.2. Triterpen khung ursan 15
1.2.5.3. Triterpen khung lupan
1.2.6. Các hợp chất khác
1.3. Tình hình nghiên cứu và sử dụng các thực vật Syzygium 20
1.3.1. Những nghiên cứu về cây Syzygium formosum trong nước 20
1.3.2. Cây Syzygium formosum Wall (Đơn tướng quân, Trâm chụm ba)21
1.3.2.1.Đặc điểm thực vật học, phân bố 21
1.3.2.2. Đặc điểm sinh thái 21
1.3.3. Những ứng dụng của cây Syzygium formosum Wall trong y
học cổ truyền Việt Nam22
Chương 2. Phần thực nghiệm 23
2.1. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 23
2.1.1. Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu23
2.1.2. Thử hoạt tính sinh học 26
2.1.3. Phương pháp nghiên cứu, phân lập các hợp chất từ dịch chiết26
2.1.4. Phương pháp khảo sát cấu trúc hóa học các chất 27
2.2. công cụ hóa chất và thiết bị nghiên cứu 27
2.3. Thu nhận các dịch chiết từ cây Syzygium formosum Wall 28
2.3.1. Thu nhận các dịch chiết 28
2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 30
2.3.3. Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 33
2.4. Phân lập và tinh chế các chất 35
2.4.1. Cặn dịch chiết n – hexan 35
2.4.2. Cặn dịch chiết etylaxetat 37
Chương 3. Thảo luận kết quả nghiên cứu 43
3.1. Phát hiện các nhóm chất và thử hoạt tính sinh học dịch chiết
của cây Syzygium formosum Wall 43
3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết 44
Kết luận 77
Danh mục các công trình đã công bố có liên quan đến luận văn
Tài liệu tham khảo
Phụ lục
Để tải bản Đầy Đủ của tài liệu, xin Trả lời bài viết này, Mods sẽ gửi Link download cho bạn sớm nhất qua hòm tin nhắn.
Ai cần download tài liệu gì mà không tìm thấy ở đây, thì đăng yêu cầu down tại đây nhé:
Nhận download tài liệu miễn phí
Tóm tắt nội dung tài liệu:
ược kết hợp nhữngphương pháp khác nhau: dùng dung môi có độ phân cực tăng dần để phân ly
các chất có độ phân cực gần như nhau làm cho hỗn hợp ban đầu đơn giản hơn,
sau đó dùng cách kết tinh phân đoạn hay tách trên sắc ký cột lặp lại nhiều lần
v.v...để được chất tinh khiết.
Quá trính nghiên cứu sẽ nêu chi tiết ở phần thực nghiệm
2.1.2. Thử hoạt tính sinh học
Thử hoạt tình vi sinh vật kiểm định đối với các dịch chiết thô được
thực hiện tại phòng Sinh học thực nghiệm Viện Hoá học-Viện Khoa học và
Công nghệ Việt Nam, từ kết quả thử hoạt tình sẽ xác định bản chất hoá học
của hoạt chất.
2.1.3. Phương pháp phân tích, phân lập các hợp chất từ dịch
chiết
Để phân tìch và phân tách hỗn hợp các chất cũng như phân lập các
hợp chất cần sử dụng phối hợp các phương pháp sắc ký như:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên
27
- Sắc ký lớp mỏng (SKLM)
- Sắc ký cột thường
2.1.4. Phương pháp khảo sát cấu trúc hoá học các chất
Các chất phân lập được ở dạng tinh khiết là đối tượng để khảo sát các
đặc trưng vật lý: màu sắc, dạng thù hính, Rf, điểm nóng chảy, đo hoạt tình
quang học v.v.. khi các chất đủ sạch sẽ tiến hành ghi các phổ tử ngoại, phổ
hồng ngoại (FT-IR), phổ khối lượng (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton
(
1
H-NMR), cacbon-13 (
13
C-NMR) với các kỹ thuật một chiều (1D-NMR) và hai
chiều (2D-NMR) tuỳ theo chất cụ thể.
2.2. DỤNG CỤ, HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU
2.2.1. Dụng cụ, hoá chất
Các dung môi để ngâm chiết mẫu đều dùng loại tinh khiết (pure), khi
dùng cho các loại sắc ký cột, sắc ký bản mỏng, sắc ký lớp mỏng điều chế phải
sử dụng loại tinh khiết phân tìch (PA).
Sắc ký lớp mỏng tự chế với các kìch thước khác nhau đã dùng loại
silicagel G60 của hãng Merck tráng trên tấm thuỷ tinh và hoạt hoá ở nhiệt độ
120C thời gian từ 1,5 giờ đến 2 giờ. Sắc ký lớp mỏng đế nhôm tráng sẵn
Kieselgel 60F254 độ dày 0,2 mm (Art. 5554).
Các hệ dung môi triển khai SKLM:
1. n-Hexan - EtOAc (8 : 1) hệ A
2. n-Hexan - EtOAc (4 : 1) hệ B
3. Cloroform - metanol (9 : 1) hệ C
4. Cloroform - metanol (5 : 1) hệ D
Các sắc ký lớp mỏng (SKLM) được soi dưới đèn tử ngoại ở 254 nm
(cho loại kieselgel 60F254) rồi phun thuốc thử vanilin - H2SO4 5% và sấy ở
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên
28
trên 100
oC để phát hiện các hợp chất.
Các giá trị Rf trong hệ dung môi triển khai biểu thị là Rf A (B, C)x100.
Sắc ký cột thường sử dụng silicagel Merck 60, cỡ hạt 70 - 230 mesh
(0,040 - 0,063 mm) và 230-400 mesh (0,063 đến 0,200 mm).
2.2.2. Thiết bị nghiên cứu
- Nhiệt độ nóng chảy đo trên kình hiển vi Boëtus hay trên máy
Electrothermal IA-9200.
- Phổ hồng ngoại ghi trên máy IMPACT - 410 (Viện Hoá học - Viện
Khoa học và Công nghệ Việt nam) dưới dạng viên nén KBr.
- Phổ khối lượng ghi trên máy MS-Engine-5989-HP (Viện Hoá học -Khoa
học và Công nghệ Việt nam) theo kiểu va chạm electron (EI) ở 70eV, sử dụng
ngân hàng dữ liệu DATABASE/WILLEY 250L hay trên máy sắc ký lỏng ghép
khối phổ với đầu dò MSD (LC-MSD-Trap-SL) sử dụng mode ESI và đầu dò
DAD.
- Phổ 1H và 13C-NMR ghi trên máy Bruker 500MHz AVANCE, chuẩn
nội TMS, dung môi CDCl3, CD3OD, DMSO-d6.
2.3. THU NHẬN CÁC DỊCH CHIẾT TỪ CÂY SYZYGIUM
FORMOSUM WALL.,
2.3.1. Thu nhận các dịch chiết
Mẫu cây tươi mới thu hái được sấy khô đem nghiền nhỏ rồi ngâm kiệt
với metanol ở nhiệt độ phòng cho đến khi nhạt màu. Dịch chiết được cất loại
dung môi ở áp suất giảm. Cặn dịch chiết metanol được chiết lần lượt với n-
hexan, etylaxetat, metanol và thu được các cặn chiết tương ứng, làm khan
bằng Na2SO4. Việc thu nhận các dịch chiết từ cây Đơn tướng quân (Syzygium
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên
29
formosum Wall.,) tóm tắt trong sơ đồ 2.1.
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết mẫu cây Đơn tướng quân
(Syzygium formosum Wall., )
1. MeOH
2. Cất loại dung môi dưói áp suất giảm
3. Cặn
Sy.H Sy.E Sy.M
Các phân đoạn dịch chiết nói trên được làm khan bằng Na2SO4 , lọc
rồi cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm, cặn được sấy khô và cân đến khối
lượng không đổi. Như vậy từ lá cây Syzygium formosum Wall., sẽ có 3 loại
cặn chiết được ký hiệu là:
Sy. H, Sy. E, Sy. M
Ký hiệu:
Sy. H: Cặn chiết n-Hexan của lá Syzygium formosum Wall
Sy. E: Cặn chiết EtOAc của lá cây Syzygium formosum Wall
Sy. M: Cặn chiết MeOH của lá cây Syzygium formosum Wall
Mẫu khô nghiền nhỏ
n- hexan Etylaxetat Metanol
Cặn tổng Metanol
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên
30
Kết quả thu nhận các dịch chiết từ lá cây Đơn tướng quân ở Thái Nguyên
được nêu trong bảng 2.1
Bảng 2.1 : Khối lượng các cặn chiết thu được từ cây Đơn tướng quân
( Syzygium formosum Wall.,)
Mẫu thu vào
tháng
02/2009
Khối lượng
mẫu khô (g)
Khối lượng cặn chiết thu được (g)
n-hexan
EtOAc
MeOH
Lá
1200
15,3
( Sy.H)
48,2
( Sy.E)
52,1
(Sy.M)
2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết
2.3.2.1. Phát hiện các hợp chất sterol
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% đun
cách thuỷ đến khô. Hoà tan cặn trong 3ml cloroform - lấy dịch cloroform để
làm phản ứng định tình các sterol và thuốc thử Lieberman - Bourchardt (gồm
hỗn hợp 1ml anhydric acetic + 1ml cloroform để lạnh ở 00C, sau đó cho thêm
1 giọt H2SO4 đậm đặc). Lấy 1ml dịch cloroform rồi thêm 1 giọt thuốc thử,
dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tình.
2.3.2.2. Phát hiện các ancaloid
Lấy 0.01g cặn các phân đoạn, thêm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy
lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
Ống (1): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu có tủa trắng và
nhiều là phản ứng dương tình.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên
31
Ống (2): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorf, nếu xuất hiện màu da cam là
phản ứng dương tình.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng
dương tình.
2.3.2.3. Phát hiện các flavonoid
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml mêtanol, đun nóng cho
tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ìt bột
magiê (Mg) hay Zn, sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bính cách
thuỷ vài phút. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hay màu hồng là phản ứng
dương tình với các flavonoid.
2.3.2.4. Phát hiện các cumarin
Dịch để thử định tình được chuẩn bị như mục 2.3.2.1. Lấy vào 2 ống
nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đó 0,5ml dung dịch
NaOH 10%. Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi mỗi ống cho
thêm 4ml nước cất. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm
có thể xem là phản ứng dương tình, nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một
vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng xuất hiện
vẩn đục và có thể tạo ra tủa là phản ứng dương tình.
Ngoài ra có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi
trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, sẽ là dương tình cho cumarin.
2.3.2.5. Định tính các glucosid tim
Chuẩn bị dịch thử định tình cũng làm nh...