caroline_blessyou96
New Member
Download Luận văn Nghiên cứu hiện trạng nhiễm bệnh TSWV (Tomato spotted wilt virus) trên cây ớt bằng kỹ thuật ELISA và bước đầu xây dựng phương pháp chẩn đoán bằng kỹ thuật RT - PCR
MỤC LỤC
Trang tựa . ii
Cảm tạ . iii
Tóm tắt . iv
Danh sách các chữ viết tắt . vi
Mục lục . vii
Danh sách các bảng . xi
Danh sách các đồ thị . xi
Danh sách các hình . xii
Danh sách các sơ đồ . xii
Phần I. Mở Đầu . 1
1.1 Đặt vấn đề . 1
1.2 Mục Đích - Yêu cầu . 1
1.2.1 Mục đích nghiên cứu . 1
1.2.2 Yêu cầu . 1
Phần II. Tổng Quan Tài Liệu . 2
2.1 Giới thiệu về cây ớt . 2
2.1.1 Sơ lƣợc về cây ớt . 2
2.1.2 Nguồn gốc cây ớt . 2
2.1.3 Đặc điểm thực vật học của cây ớt . 2
2.1.3.1 Thân . 2
2.1.3.2 Rễ . 2
2.1.3.3 Lá . 2
2.1.3.4 Hoa . 3
2.1.3.5 Quả . 3
2.1.3.6 Hạt . 3
2.1.4 Giá trị dƣợc liệu của cây ớt . 3
2.1.5 Giá trị dinh dƣỡng của ớt . 4
2.2 Một số bệnh trên cây ớt gây ra bởi các virút khác . 4
2.3 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh của cây ớt . 9
viii
2.3.1 Nhiệt độ. 9
2.3.2 Ánh sáng . 9
2.3.3 Ẩm độ . 9
2.3.4 Đất và dinh dƣỡng . 9
2.4. Giới thiệu về Tomato spotted Wilt Virus (TSWV) . 10
2.4.1 Sơ lƣợc nguồn gốc TSWV . 10
2.4.2 Cấu trúc TSWV . 10
2.5 Hình thức tấn công và gây bệnh . 13
2.6 Triệu chứng chung trên các loại cây trồng bị nhiễm TSWV . 14
2.7 Triệu chứng cụ thể trên cây ớt . 14
2.8 Con đƣờng lây bệnh và dịch tễ học . 15
2.9 Điều kiện cho bệnh phát triển . 16
2.10 Khống chế bệnh TSWV . 16
2.11 Chẩn đoán bệnh TSWV . 18
2.11.1 Phƣơng pháp cây chỉ thị . 18
2.11.1.1 Cây nhiễm bộ phận . 18
2.11.1.2 Cây nhiễm hệ thống . 18
2.11.2 Phƣơng pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử. 19
2.12 ELISA . 19
2.12.1 Khái niệm về ELISA . 19
2.12.2 Phân loại ELISA . 20
2.12.2.1 Direct ELISA (ELISA trực tiếp) . 20
2.12.2.2 ELISA gián tiếp . 21
2.12.2.3 Sandwich ELISA . 21
2.12.2.4 Phản ứng ức chế /cạnh tranh . 22
2.12.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến độ nhạy của phản ứng ELISA . 23
2.12.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến kết quả ELISA . 23
2.13 Giới thiệu về kỹ thuật PCR . 23
2.13.1 Nguyên tắc của kỹ thuật PCR . 23
2.13.2.Tối ƣu hóa các điều kiện cho phản ứng PCR . 25
2.13.3 Ƣu, nhƣợc điểm của kỹ thuật PCR . 30
2.13.4 Các vấn đề thƣờng gặp trong phản ứng PCR và hƣớng giải quyết . 31
ix
2.13.4.1 Có nhiều sản phẩm không chuyên biệt có kích thƣớc dài hơn . 31
2.13.4.2 Có nhiều sản phẩm không đặc hiệu với kích thƣớc ngắn hơn . 32
2.13.4.3 Không thu đƣợc bất kỳ sản phẩm nào. 32
2.13.4.4 Sản phẩm quá yếu . 33
2.13.4.5 Hai primer có nhiệt độ Tm khác nhau . 33
2.14 Phƣơng pháp RT-PCR . 33
2.14.1 Phân loại RT – PCR . 33
2.14.1.1 Phản ứng RT – PCR một bƣớc . 33
2.14.1.2 Phản ứng RT – PCR hai bƣớc . 34
2.14.2 Các phƣơng pháp đƣợc thực hiện trong phản ứng tổng hợp cDNA . 34
2.15 Những nghiên cứu trong nƣớc và trên thế giới về mức độ gây hại của TSWV . 35
2.15.1 Những nghiên cứu tại Việt Nam . 35
2.15.2 Những nghiên cứu trên thế giới . 35
Phần III. Vật Liệu và Phƣơng Pháp Nghiên Cứu . 36
3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 36
3.2 Phƣơng pháp điều tra và lấy mẫu . 36
3.3 Phƣơng pháp lấy mẫu . 36
3.4 Các phƣơng pháp chẩn đoán TSWV . 37
3.4.1 Chẩn đoán bằng dDAS – ELISA . 37
3.4.1.1 công cụ và hoá chất cần thiết cho việc chẩn đoán bằng ELISA . 37
3.4.1.2 Các bƣớc thực hiện . 37
3.4.2 Chẩn đoán TSWV bằng RT – PCR . 39
3.4.2.1 Giai đoạn ly trích RNA theo Kit ly trích của Biorad . 39
3.4.2.2 Kiểm tra sự hiện diện của RNA bằng điện di . 40
3.4.2.3 Lựa chọn cặp Primer chạy RT – PCR . 40
3.4.2.4 Khuếch đại bằng RT – PCR . 41
3.4.2.5 Phƣớng pháp đổ gel agarose điện di . 43
Phần IV. Kết quả Thảo luận . 45
4.1 Mức độ nhiễm bệnh TSWV ở 3 xã thay mặt cho 3 huyện qua chẩn đoán ELISA . 45
4.1.1 Tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV theo địa bàn điều tra . 45
4.1.2 Tỷ lệ nhiễm TSWV theo từng giống ớt . 46
4.1.3 Tỷ lệ nhiễm virút TSWV theo triệu chứng . 47
x
4.1.4 Tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV theo độ tuổi . 50
4.2 Kết quả tiến trình RT – PCR . 51
4.2.1 Kết quả kiểm tra RNA . 51
4.2.2 Kết quả kiểm tra Primer . 52
4.2.3 Kết quả tiến trình RT – PCR. 53
4.2.4 Kết quả tiến trình thiết kế primer cho Nested PCR . 54
Phần V. Kết luận và đề nghị . 60
5.1 Kết luận. 60
5.2 Đề nghị . 60
Phần VI. TÀI LIỆU THAM KHẢO . 61
PHẦN VII. PHỤ LỤC . 64
++ Ai muốn tải bản DOC Đầy Đủ thì Trả lời bài viết này, mình sẽ gửi Link download cho!
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
Đề tài:
NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato
spotted wilt virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA
VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN
BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR
Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khóa: 2001-2005
Sinh viên thực hiện: NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2005
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
******
NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato
spotted wilt virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA
VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN
BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR
Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
PGS. TS. BÙI CÁCH TUYẾN NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2005
iii
LỜI CẢM TẠ
Chân thành cảm tạ
Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm
Bộ môn Công Nghệ Sinh Học cùng toàn thể Quý Thầy Cô trong Bộ môn đã tận tình
dạy dỗ giúp đỡ em trong suốt thời gian học tập.
PGS. TS. Bùi Cách Tuyến tận tình hướng dẫn tui thực hiện đề tài này.
TS. Bùi Minh Trí đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để tui thực hiện đề tài này.
KS. Phạm Đức Toàn đã hết lòng giúp đỡ tui thực hiện đề tài này.
Các anh, chị đang công tác tại Trung tâm Phân tích Thí nghiệm trường Đại học
Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh đã tận tình giúp đỡ tui trong suốt thời gian thực
tập tốt nghiệp.
Cô Lê Thị Thu Hà công tác tại trạm Bảo vệ Thực vật huyện Củ Chi đã giúp tui
trong quá trình tìm hiểu tình hình canh tác nông nghiệp trong huyện.
Các cô, chú bác nông dân đã tận tình giúp đỡ trong quá trình điều tra thu thập
mẫu.
Cùng các bạn bè chung lớp đã giúp đỡ tôi.
Thành kính ghi ơn
Ông bà đã dạy bảo cho con thành người có ích.
Cha mẹ đã sinh con, nuôi dạy cho con ăn học để con đạt được kết quả như ngày
hôm nay.
Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 09 năm 2005
Sinh viên thực hiện
Nguyễn Đình Trường
iv
TÓM TẮT
NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh. Tháng
9/2005. “NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato spotted wilt
virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG
PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN BẰNG RT – PCR”.
Hội đồng hƣớng dẫn:
PGS.TS. BÙI CÁCH TUYẾN
Đề tài đƣợc tiến hành tại các xã trong huyện Củ Chi, Trảng Bàng, Châu
Thành
Điều tra mức độ nhiễm bệnh TSWV trên cây ớt, tại các xã trong huyện
Tiến hành lấy mẫu bệnh TSWV tại vùng điều tra và chẩn đoán bằng kỹ thuật
ELISA và RT – PCR tại Trung tâm phân tích Thí Nghiệm, Bộ môn Bảo vệ
Thực vật Trƣờng Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.
Nội dung thực hiện:
Điều tra, đánh giá tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV ngoài đồng bằng sự đánh giá về
hình thái.
Lấy mẫu, tiến hành chẩn đoán bằng phƣơng pháp ELISA và RT - PCR, từ đó
rút ra kết luận về triệu chứng điển hình của TSWV trên cây ớt.
Kết quả đạt đƣợc:
Tỷ lệ nhiễm TSWV theo địa bàn điều tra
- Nhuận Đức: 12,1%
- Phƣớc Thạnh: 12,5%
- Lộc Hƣng: 0%
Tỷ lệ nhiễm TSWV theo triệu chứng
- Lá khảm vàng xanh, cong, héo rũ: 37,5%
- Lá chấm vàng xanh, nhăn nheo, co lại, dày, giòn: 57%
- Lá khảm nặng có chấm đen, lủng lỗ:53%
v
- Khảm vàng nhạt trên lá và cả rìa lá: 25%
Tỷ lệ nhiễm trên trái
- Trái nhiễm: 33%
- Không nhiễm: 67%
vi
DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT
TSWV: Tomato Spotted Wilt Virus
dDAS-ELISA: direct Double Antibody Sandwich Enzyme Linked Immuno Sorbent
Assay
RT-PCR: Reverse Transciptase-Polymerase Chain Reaction
Genome L: Genome long
Genome M: Genome medium
Genome S: Genome short
N: Nucleocapside
cRNA: Complementary RNA
vRNA: Virion RNA
Tm: Melting temperature
Ta: Annealing temperature
GSP: Gen Special Primer
cDNA: Complementary DNA
p-NPP: p-Nitrophenyl phosphate
RNAbc: RNA binding column
PVP: Polyvinylpyrolydol
vii
MỤC LỤC
Trang
Trang tựa .......................................................................................................................... ii
Cảm tạ ............................................................................................................................ iii
Tóm tắt ............................................................................................................................ iv
Danh sách các chữ viết tắt .............................................................................................. vi
Mục lục .......................................................................................................................... vii
Danh sách các bảng ........................................................................................................ xi
Danh sách các đồ thị ....................................................................................................... xi
Danh sách các hình ........................................................................................................ xii
Danh sách các sơ đồ ...................................................................................................... xii
Phần I. Mở Đầu .............................................................................................................. 1
1.1 Đặt vấn đề .................................................................................................................. 1
1.2 Mục Đích - Yêu cầu .................................................................................................. 1
1.2.1 Mục đích nghiên cứu ........................................................................................... 1
1.2.2 Yêu cầu ................................................................................................................ 1
Phần II. Tổng Quan Tài Liệu ....................................................................................... 2
2.1 Giới thiệu về cây ớt ................................................................................................... 2
2.1.1 Sơ lƣợc về cây ớt ................................................................................................. 2
2.1.2 Nguồn gốc cây ớt ................................................................................................. 2
2.1.3 Đặc điểm thực vật học của cây ớt ........................................................................ 2
2.1.3.1 Thân ............................................................................................................... 2
2.1.3.2 Rễ ................................................................................................................... 2
2.1.3.3 Lá ................................................................................................................... 2
2.1.3.4 Hoa ................................................................................................................. 3
2.1.3.5 Quả ................................................................................................................. 3
2.1.3.6 Hạt .................................................................................................................. 3
2.1.4 Giá trị dƣợc liệu của cây ớt .................................................................................. 3
2.1.5 Giá trị dinh dƣỡng của ớt ..................................................................................... 4
2.2 Một số bệnh trên cây ớt gây ra bởi các virút khác .................................................... 4
2.3 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh của cây ớt .................................................................. 9
viii
2.3.1 Nhiệt độ...........................................................................................
Download Luận văn Nghiên cứu hiện trạng nhiễm bệnh TSWV (Tomato spotted wilt virus) trên cây ớt bằng kỹ thuật ELISA và bước đầu xây dựng phương pháp chẩn đoán bằng kỹ thuật RT - PCR miễn phí
MỤC LỤC
Trang tựa . ii
Cảm tạ . iii
Tóm tắt . iv
Danh sách các chữ viết tắt . vi
Mục lục . vii
Danh sách các bảng . xi
Danh sách các đồ thị . xi
Danh sách các hình . xii
Danh sách các sơ đồ . xii
Phần I. Mở Đầu . 1
1.1 Đặt vấn đề . 1
1.2 Mục Đích - Yêu cầu . 1
1.2.1 Mục đích nghiên cứu . 1
1.2.2 Yêu cầu . 1
Phần II. Tổng Quan Tài Liệu . 2
2.1 Giới thiệu về cây ớt . 2
2.1.1 Sơ lƣợc về cây ớt . 2
2.1.2 Nguồn gốc cây ớt . 2
2.1.3 Đặc điểm thực vật học của cây ớt . 2
2.1.3.1 Thân . 2
2.1.3.2 Rễ . 2
2.1.3.3 Lá . 2
2.1.3.4 Hoa . 3
2.1.3.5 Quả . 3
2.1.3.6 Hạt . 3
2.1.4 Giá trị dƣợc liệu của cây ớt . 3
2.1.5 Giá trị dinh dƣỡng của ớt . 4
2.2 Một số bệnh trên cây ớt gây ra bởi các virút khác . 4
2.3 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh của cây ớt . 9
viii
2.3.1 Nhiệt độ. 9
2.3.2 Ánh sáng . 9
2.3.3 Ẩm độ . 9
2.3.4 Đất và dinh dƣỡng . 9
2.4. Giới thiệu về Tomato spotted Wilt Virus (TSWV) . 10
2.4.1 Sơ lƣợc nguồn gốc TSWV . 10
2.4.2 Cấu trúc TSWV . 10
2.5 Hình thức tấn công và gây bệnh . 13
2.6 Triệu chứng chung trên các loại cây trồng bị nhiễm TSWV . 14
2.7 Triệu chứng cụ thể trên cây ớt . 14
2.8 Con đƣờng lây bệnh và dịch tễ học . 15
2.9 Điều kiện cho bệnh phát triển . 16
2.10 Khống chế bệnh TSWV . 16
2.11 Chẩn đoán bệnh TSWV . 18
2.11.1 Phƣơng pháp cây chỉ thị . 18
2.11.1.1 Cây nhiễm bộ phận . 18
2.11.1.2 Cây nhiễm hệ thống . 18
2.11.2 Phƣơng pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử. 19
2.12 ELISA . 19
2.12.1 Khái niệm về ELISA . 19
2.12.2 Phân loại ELISA . 20
2.12.2.1 Direct ELISA (ELISA trực tiếp) . 20
2.12.2.2 ELISA gián tiếp . 21
2.12.2.3 Sandwich ELISA . 21
2.12.2.4 Phản ứng ức chế /cạnh tranh . 22
2.12.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến độ nhạy của phản ứng ELISA . 23
2.12.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến kết quả ELISA . 23
2.13 Giới thiệu về kỹ thuật PCR . 23
2.13.1 Nguyên tắc của kỹ thuật PCR . 23
2.13.2.Tối ƣu hóa các điều kiện cho phản ứng PCR . 25
2.13.3 Ƣu, nhƣợc điểm của kỹ thuật PCR . 30
2.13.4 Các vấn đề thƣờng gặp trong phản ứng PCR và hƣớng giải quyết . 31
ix
2.13.4.1 Có nhiều sản phẩm không chuyên biệt có kích thƣớc dài hơn . 31
2.13.4.2 Có nhiều sản phẩm không đặc hiệu với kích thƣớc ngắn hơn . 32
2.13.4.3 Không thu đƣợc bất kỳ sản phẩm nào. 32
2.13.4.4 Sản phẩm quá yếu . 33
2.13.4.5 Hai primer có nhiệt độ Tm khác nhau . 33
2.14 Phƣơng pháp RT-PCR . 33
2.14.1 Phân loại RT – PCR . 33
2.14.1.1 Phản ứng RT – PCR một bƣớc . 33
2.14.1.2 Phản ứng RT – PCR hai bƣớc . 34
2.14.2 Các phƣơng pháp đƣợc thực hiện trong phản ứng tổng hợp cDNA . 34
2.15 Những nghiên cứu trong nƣớc và trên thế giới về mức độ gây hại của TSWV . 35
2.15.1 Những nghiên cứu tại Việt Nam . 35
2.15.2 Những nghiên cứu trên thế giới . 35
Phần III. Vật Liệu và Phƣơng Pháp Nghiên Cứu . 36
3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 36
3.2 Phƣơng pháp điều tra và lấy mẫu . 36
3.3 Phƣơng pháp lấy mẫu . 36
3.4 Các phƣơng pháp chẩn đoán TSWV . 37
3.4.1 Chẩn đoán bằng dDAS – ELISA . 37
3.4.1.1 công cụ và hoá chất cần thiết cho việc chẩn đoán bằng ELISA . 37
3.4.1.2 Các bƣớc thực hiện . 37
3.4.2 Chẩn đoán TSWV bằng RT – PCR . 39
3.4.2.1 Giai đoạn ly trích RNA theo Kit ly trích của Biorad . 39
3.4.2.2 Kiểm tra sự hiện diện của RNA bằng điện di . 40
3.4.2.3 Lựa chọn cặp Primer chạy RT – PCR . 40
3.4.2.4 Khuếch đại bằng RT – PCR . 41
3.4.2.5 Phƣớng pháp đổ gel agarose điện di . 43
Phần IV. Kết quả Thảo luận . 45
4.1 Mức độ nhiễm bệnh TSWV ở 3 xã thay mặt cho 3 huyện qua chẩn đoán ELISA . 45
4.1.1 Tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV theo địa bàn điều tra . 45
4.1.2 Tỷ lệ nhiễm TSWV theo từng giống ớt . 46
4.1.3 Tỷ lệ nhiễm virút TSWV theo triệu chứng . 47
x
4.1.4 Tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV theo độ tuổi . 50
4.2 Kết quả tiến trình RT – PCR . 51
4.2.1 Kết quả kiểm tra RNA . 51
4.2.2 Kết quả kiểm tra Primer . 52
4.2.3 Kết quả tiến trình RT – PCR. 53
4.2.4 Kết quả tiến trình thiết kế primer cho Nested PCR . 54
Phần V. Kết luận và đề nghị . 60
5.1 Kết luận. 60
5.2 Đề nghị . 60
Phần VI. TÀI LIỆU THAM KHẢO . 61
PHẦN VII. PHỤ LỤC . 64
++ Ai muốn tải bản DOC Đầy Đủ thì Trả lời bài viết này, mình sẽ gửi Link download cho!
Tóm tắt nội dung:
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
Đề tài:
NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato
spotted wilt virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA
VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN
BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR
Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khóa: 2001-2005
Sinh viên thực hiện: NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2005
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
******
NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato
spotted wilt virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA
VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN
BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR
Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
PGS. TS. BÙI CÁCH TUYẾN NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8/2005
iii
LỜI CẢM TẠ
Chân thành cảm tạ
Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm
Bộ môn Công Nghệ Sinh Học cùng toàn thể Quý Thầy Cô trong Bộ môn đã tận tình
dạy dỗ giúp đỡ em trong suốt thời gian học tập.
PGS. TS. Bùi Cách Tuyến tận tình hướng dẫn tui thực hiện đề tài này.
TS. Bùi Minh Trí đã tạo mọi điều kiện tốt nhất để tui thực hiện đề tài này.
KS. Phạm Đức Toàn đã hết lòng giúp đỡ tui thực hiện đề tài này.
Các anh, chị đang công tác tại Trung tâm Phân tích Thí nghiệm trường Đại học
Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh đã tận tình giúp đỡ tui trong suốt thời gian thực
tập tốt nghiệp.
Cô Lê Thị Thu Hà công tác tại trạm Bảo vệ Thực vật huyện Củ Chi đã giúp tui
trong quá trình tìm hiểu tình hình canh tác nông nghiệp trong huyện.
Các cô, chú bác nông dân đã tận tình giúp đỡ trong quá trình điều tra thu thập
mẫu.
Cùng các bạn bè chung lớp đã giúp đỡ tôi.
Thành kính ghi ơn
Ông bà đã dạy bảo cho con thành người có ích.
Cha mẹ đã sinh con, nuôi dạy cho con ăn học để con đạt được kết quả như ngày
hôm nay.
Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 09 năm 2005
Sinh viên thực hiện
Nguyễn Đình Trường
iv
TÓM TẮT
NGUYỄN ĐÌNH TRƢỜNG, Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh. Tháng
9/2005. “NGHIÊN CỨU HIỆN TRẠNG NHIỄM BỆNH TSWV (Tomato spotted wilt
virus) TRÊN CÂY ỚT BẰNG KỸ THUẬT ELISA VÀ BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG
PHƢƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN BẰNG RT – PCR”.
Hội đồng hƣớng dẫn:
PGS.TS. BÙI CÁCH TUYẾN
Đề tài đƣợc tiến hành tại các xã trong huyện Củ Chi, Trảng Bàng, Châu
Thành
Điều tra mức độ nhiễm bệnh TSWV trên cây ớt, tại các xã trong huyện
Tiến hành lấy mẫu bệnh TSWV tại vùng điều tra và chẩn đoán bằng kỹ thuật
ELISA và RT – PCR tại Trung tâm phân tích Thí Nghiệm, Bộ môn Bảo vệ
Thực vật Trƣờng Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.
Nội dung thực hiện:
Điều tra, đánh giá tỷ lệ nhiễm bệnh TSWV ngoài đồng bằng sự đánh giá về
hình thái.
Lấy mẫu, tiến hành chẩn đoán bằng phƣơng pháp ELISA và RT - PCR, từ đó
rút ra kết luận về triệu chứng điển hình của TSWV trên cây ớt.
Kết quả đạt đƣợc:
Tỷ lệ nhiễm TSWV theo địa bàn điều tra
- Nhuận Đức: 12,1%
- Phƣớc Thạnh: 12,5%
- Lộc Hƣng: 0%
Tỷ lệ nhiễm TSWV theo triệu chứng
- Lá khảm vàng xanh, cong, héo rũ: 37,5%
- Lá chấm vàng xanh, nhăn nheo, co lại, dày, giòn: 57%
- Lá khảm nặng có chấm đen, lủng lỗ:53%
v
- Khảm vàng nhạt trên lá và cả rìa lá: 25%
Tỷ lệ nhiễm trên trái
- Trái nhiễm: 33%
- Không nhiễm: 67%
vi
DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT
TSWV: Tomato Spotted Wilt Virus
dDAS-ELISA: direct Double Antibody Sandwich Enzyme Linked Immuno Sorbent
Assay
RT-PCR: Reverse Transciptase-Polymerase Chain Reaction
Genome L: Genome long
Genome M: Genome medium
Genome S: Genome short
N: Nucleocapside
cRNA: Complementary RNA
vRNA: Virion RNA
Tm: Melting temperature
Ta: Annealing temperature
GSP: Gen Special Primer
cDNA: Complementary DNA
p-NPP: p-Nitrophenyl phosphate
RNAbc: RNA binding column
PVP: Polyvinylpyrolydol
vii
MỤC LỤC
Trang
Trang tựa .......................................................................................................................... ii
Cảm tạ ............................................................................................................................ iii
Tóm tắt ............................................................................................................................ iv
Danh sách các chữ viết tắt .............................................................................................. vi
Mục lục .......................................................................................................................... vii
Danh sách các bảng ........................................................................................................ xi
Danh sách các đồ thị ....................................................................................................... xi
Danh sách các hình ........................................................................................................ xii
Danh sách các sơ đồ ...................................................................................................... xii
Phần I. Mở Đầu .............................................................................................................. 1
1.1 Đặt vấn đề .................................................................................................................. 1
1.2 Mục Đích - Yêu cầu .................................................................................................. 1
1.2.1 Mục đích nghiên cứu ........................................................................................... 1
1.2.2 Yêu cầu ................................................................................................................ 1
Phần II. Tổng Quan Tài Liệu ....................................................................................... 2
2.1 Giới thiệu về cây ớt ................................................................................................... 2
2.1.1 Sơ lƣợc về cây ớt ................................................................................................. 2
2.1.2 Nguồn gốc cây ớt ................................................................................................. 2
2.1.3 Đặc điểm thực vật học của cây ớt ........................................................................ 2
2.1.3.1 Thân ............................................................................................................... 2
2.1.3.2 Rễ ................................................................................................................... 2
2.1.3.3 Lá ................................................................................................................... 2
2.1.3.4 Hoa ................................................................................................................. 3
2.1.3.5 Quả ................................................................................................................. 3
2.1.3.6 Hạt .................................................................................................................. 3
2.1.4 Giá trị dƣợc liệu của cây ớt .................................................................................. 3
2.1.5 Giá trị dinh dƣỡng của ớt ..................................................................................... 4
2.2 Một số bệnh trên cây ớt gây ra bởi các virút khác .................................................... 4
2.3 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh của cây ớt .................................................................. 9
viii
2.3.1 Nhiệt độ...........................................................................................